RESUMO Neste estudo, os efeitos tóxicos da melitina em células Madin-Darby Bovine Kidney (MDBK) foram analisados quanto à funcionalidade mitocondrial, por redução de MTT e citometria de fluxo, potencial de apoptose, necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e fragmentação de DNA, utilizando-se citometria de fluxo e desestabilização da membrana celular, por microscopia confocal. A toxicidade apresentou características dose-dependentes e a atividade mitocondrial foi inibida até 78,24±3,59% (P<0,01, n = 6) em células MDBK expostas à melitina (10μg/mL). Análises por citometria de fluxo revelaram que a melitina a 2μg/mL apresentou o maior índice necrótico celular (P<0,05). A maior lipoperoxidação de membranas também foi na concentração de 2μg/mL de melitina (P<0,05), o que foi posteriormente confirmado por microscopia confocal. A maior produção de ROS aconteceu quando as células foram expostas a 2,5μg/mL de melitina (P<0,05), e essa concentração também aumentou a fragmentação de DNA (P<0,05). Houve uma significativa correlação positiva entre a lipoperoxidação de membranas e a produção de ROS (R=0,4158), funcionalidade mitocondrial (R=0,4149) e apoptose (R=0,4978). Portanto, o estresse oxidativo gerado pela melitina culminou na elevação de ROS intracelular, que inicia uma cascata de eventos tóxicos nas células MDBK.

ABSTRACT In this study, the toxic effects of melittin on Madin-Darby Bovine Kidney cells (MDBK) were analyzed with respect to mitochondrial functionality by reduction of MTT and flow cytometry, apoptosis potential, necrosis, oxygen reactive species (ROS) production, lipid peroxidation, and DNA fragmentation using flow cytometry and cell membrane destabilization by confocal microscopy. The toxicity presented dose-dependent characteristics and mitochondrial activity was inhibited by up to 78.24 ±3.59% (P<0.01, n = 6) in MDBK cells exposed to melittin (10μg/mL). Flow cytometry analysis revealed that melittin at 2μg/mL had the highest necrosis rate (P<0.05) for the cells. The lipoperoxidation of the membranes was also higher at 2μg/mL of melittin (P<0.05), which was further confirmed by the microphotographs obtained by confocal microscopy. The highest ROS production occurred when the cells were exposed to 2.5μg/mL melittin (P<0.05), and this concentration also increased DNA fragmentation (P<0.05). There was a significative and positive correlation between the lipoperoxidation of membranes with ROS (R=0.4158), mitochondrial functionality (R=0.4149), and apoptosis (R=0.4978). Thus, the oxidative stress generated by melittin culminates in the elevation of intracellular ROS that initiates a cascade of toxic events in MDBK cells.

RESUMO Das células do sistema imunológico, macrófagos desempenham um papel fundamental. Apamina, constituinte do veneno de abelhas, é importante na defesa destas. Objetivou-se avaliar o metabolismo da linhagem de macrófagos J774 1.6 expostos à apamina isolada e purificada, avaliando-se citotoxicidade por redução de MTT e análise por citometria de fluxo (apoptose / necrose, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), lipoperoxidação membranosa (LPO), potencial elétrico da membrana mitocondrial (MMP) e fragmentação do DNA). Nenhuma concentração testada (10 a 100μg / mL) foi citotóxica. As taxas de apoptose diminuíram nas concentrações 2,5, 5,0 e 10,0μg / mL (P<0,05), enquanto as de necrose aumentaram (P<0,05). Entretanto, as taxas de células saudáveis na maior concentração testada (10μg / mL) não diferiram do controle (P>0,05). A apamina não alterou as ERO, a LPO nem a fragmentação do DNA. Portanto, todas as concentrações analisadas (1,25 a 10μg / mL) diminuíram a mMP. Tal diminuição na apoptose pode ser por uma supressão de mensageiros pró-apoptóticos mitocondriais, já que este peptídeo não causa estresse oxidativo, peroxidação lipídica nem dano ao DNA. Técnicas altamente sensíveis são importantes para adequada interpretação dos mecanismos de citotoxicidade.

ABSTRACT Among the immune system cells, macrophages have an important role. Apamin, a bee venom constituent, is important in the defense of these insects. Thus, we aimed to evaluate the metabolism of J774 1.6 macrophage cell line when exposed to isolated and purified apamin, using cytotoxicity tests by MTT reduction and analysis by flow cytometry (apoptosis / necrosis, production of reactive oxygen species (ROS), membranous lipoperoxidation (LPO), electrical potential of the mitochondrial membrane (mMP) and DNA fragmentation). None of the tested concentrations (10 to 100μg/mL) were cytotoxic according to MTT reductions. Apoptosis rates decreased at concentrations of 2.5, 5.0, and 10.0μg/mL (P<0.05), while necrosis rates increased (P<0.05). However, rates of healthy cells at the highest tested concentration (10μg/mL) did not differ from control (P>0.05). Apamin did not alter ROS, LPO, or DNA fragmentation. Therefore, all analyzed concentrations (1.25 to 10μg/mL) decreased mMP. Such decrease in apoptosis might be due to a suppression of mitochondrial pro-apoptotic messengers, as this peptide causes no oxidative stress, lipid peroxidation, and DNA damage. Highly sensitive techniques are majorly important for proper interpretation of cellular toxicity mechanisms, combined with routine laboratory methods.

RESUMO Esse estudo foi desenvolvido para avaliar os possíveis benefícios de acrescentar xanthan gum a um extensor padrão através de analises in vitro de qualidade de esperma. Semen foi coletado quatro vezes de cinco garanhões diferentes (n = 20 amostras) e submetido a armazenamen to resfriado em diferentes condições: controle (apenas extensor padrão) e três diferentes concentrações de xanthan gum (0,01%, 0,12% e 0,25%) suplementado aos extensores. Parâmetros dos espermatozoides, como mobilidade, funcionamento mitocondrial e integridade de membranas, acrossomos e DNA forma medidos após 0h, 24h, 48h e 72h de armazenamento a 5oC. Nossas observações indicaram que motilidade reduziu com armazenamento resfriado prolongado no grupo de 0,25% de suplementação de xanthan gum comparado ao grupo controle. Outros parâmetros, como funcionalidade mitocondrial e integridade de membrana e acrossomos também reduziu em todos os tratamentos durante o armazenamento, no entanto não foram detectadas diferenças significativas entre grupos tratados e grupo controle. Integridade de DNA não mudou significativamente durante armazenamento. Em conclusão, a adição de xanthan gum a extensor de sêmen equino não é danosa à estrutura do espermatozoide apesar de reduzir motilidade.

ABSTRACT This study was designed to evaluate the possible benefits of adding xanthan gum to a standard extender for equine through in vitro analyzes of sperm quality. Semen was collected four times from five different stallions (n= 20 samples) and subjected to cooled storage under different conditions: control (only standard extender) and three different concentrations of xanthan gum (0.01%, 0.12%, and 0.25%) supplemented to the extenders. Sperm parameters, such as motility, mitochondrial functionality, and membrane, acrosome, and DNA integrity were measured after 0h, 24h, 48h, and 72h of sperm storage at 5ºC. Our observations indicated that sperm motility declined with longer cooling period with the 0.25% xanthan gum supplementation group compared with the control group. Other parameters, such as mitochondrial functionality and membrane and acrosome integrity also declined for all treatments during storage; however, no differences were observed between xanthan gum and control groups. DNA integrity did not significantly change during the storage. In conclusion, the addition of xanthan gum to equine semen extender is not harmful to the sperm structure, despite reducing the sperm motility.

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pelo farelo de canola na dieta de frangos de corte sobre o desempenho, a histopatologia hepática, a morfometria da mucosa intestinal e da tiroide. Foram distribuídos 300 pintos com um dia de idade em um delineamento inteiramente causualizado, com níveis crescentes de substituição do farelo de soja pelo farelo de canola (0, 25, 50, 75 e 100%), 6 repetições com 10 aves cada. O ganho de peso diminuiu linearmente (P< 0,05) com níveis crescentes da substituição, em todas as fases. Assim como, a altura das vilosidades no duodeno e jejuno diminuiu linearmente (P< 0,05) em todas as idades avaliadas. O diâmetro do folículo e a altura do epitélio da tireoide aumentaram linearmente conforme aumentou os níveis de farelo de canola (P< 0,05). Da mesma forma, houve um aumento do peso relativo do fígado e do coração, e aparecimento de esteatose hepática nos níveis mais altos de substituição. Em conclusão, a substituição do farelo de soja pelo farelo de canola pode reduzir o desempenho, afetando negativamente a tireoide, o fígado e as características morfométricas no duodeno e jejuno.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of replacing soybean meal with canola meal in broiler diets on performance, liver histopathology, morphometry of the intestinal mucosa and thyroid. One-day-old Cobb chicks (n=300) were distributed in a completely randomized design, with increasing levels of replacement of soybean meal with canola meal (0, 25, 50, 75 and 100%) and 6 repetitions of 10 birds each. Weight gain decreased linearly (P< 0.05) with increasing levels of inclusion of canola meal, in all stages. Villus height in the duodenum and jejunum linearly decreased (P< 0.05). Follicle diameter and thyroid follicular epithelium height increased linearly with increasing levels of canola meal (P< 0.05). Similarly, there was an increase in relative weight of liver and heart, and liver steatosis in the highest levels of replacement. In conclusion, the replacement of soybean meal with canola meal can reduce performance, adversely affecting the thyroid, liver and the morphometric characteristics in the duodenum and jejunum.

RESUMO O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da administração de pST sobre o metabolismo, o tamanho testicular e a qualidade espermática de cachaços jovens. Foram usados leitões com 22 dias de idade, divididos em dois grupos: pST (n=30) e controle (n=30). O grupo pST foi submetido a injeções de pST (90µg/kg de peso vivo) a cada três dias até 330 dias de idade. Peso testicular foi avaliado aos 22, 82, 142, 202 e 365 dias de idade. Libido e qualidade do sêmen fresco foram avaliados entre 150 e 210 dias de idade. Qualidade espermática foi avaliada durante refrigeração (15ºC) por um período de 72 horas. Concentrações sanguíneas de testosterona, albumina e fósforo foram maiores no grupo pST (P<0,05). O grupo pST apresentou maior concentração de IGF-I no plasma seminal (P=0,05) e maior peso testicular, quando comparado ao grupo controle (P<0,001). O grupo pST apresentou maior volume espermático (P<0,001), concentração espermática (P=0,047) e número de doses espermáticas por ejaculado (P=0,047). Durante o período de 72 horas de refrigeração, o grupo pST teve menor número de patologias espermáticas (P<0,001). Assim, conclui-se que a administração de pST aumenta a concentração sanguínea de testosterona, o tamanho testicular e a qualidade espermática de cachaços jovens.

ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the effect of pST injections on metabolism, testicular size, and sperm characteristics in young boars. Sixty 22-day old piglets were divided into two groups: pST (n=30) and Control (n=30). The pST group was submitted to pST injections (90µg/kg body weight) every three days up to 330 days of age. Blood collections were performed weekly. Testicular weight was measures at 22, 82, 142, 202 and 365 days of age. Libido and fresh semen characteristics were evaluated between 150 and 210 days of age. Semen characteristics were also evaluated during a 72h storage period (15ºC). Testosterone, albumin, and phosphorus blood concentrations were higher in the pST group (P<0.05). The pST group had a higher IGF-I concentration in seminal plasma (P=0.05) and higher testicular weight (P<0.001) compared to the Control group. The pST group had higher ejaculate volume (P<0.001), total sperm count (P=0.047) and number of inseminating doses/ejaculate (P=0.047). During the 72h storage period, the pST group had a lower number of morphological alterations (P<0.001) compared to the Control group. In sum, pST injection in young boars increased testosterone concentration, testicular size, and sperm quality.